抗体
CRISPR / Cas9抗体
CRISPR / Casゲノム編集システムは、RNA依存性エンドヌクレアーゼ技術を用いて、ゲノムの任意の位置でのインデル変異、特定のシーケンス置換、挿入および大きな欠失、ゲノム再編成を誘導します。．さらに、この技術により特定の内因性遺伝子のアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションの仲介、ヒストン修飾またはDNAメチル化を変更が可能になります。最も知られているCRISPR関連ヌクレアーゼは、Streptococcus pyogenes（化膿レンサ球菌）およびStaphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）由来のCas9タンパク質です。最近、Cpf1（Lachnospiraceae細菌およびAcidaminococcus sp。由来）と命名された2つの新しいCRISPR関連ヌクレアーゼが記載されています。
理由1 Cas9タンパク質のトランスフェクションの成功を確認する
検証された抗Cas9抗体を用いたウエスタンブロットでCas9発現レベルをチェックする。
理由2 Cas9タンパク質が核に送達されたことを確認する
有効な抗Cas9抗体を用いてIFまたはIHCを介してCas9タンパク質の核局在を決定する。
理由3 Cas9発現レベルを確認する
一時的なシステム：ウエスタンブロットおよび抗Cas9抗体を使用することによりCas9発現が一過性であることを確認します。 延長されたCas9発現は、より多くのオフターゲット突然変異に繋がります。
安定した形質転換体：いくつかのクローンを単離し、ウエスタンブロットおよび特異的抗Cas9抗体を用いてCas9発現のレベルをチェックするスクリーニング。
高レベルのCas9発現は、非特異的活性をもたらし得ます。
理由4 Cas9の結合特異性を調べる
Cas9が正しい領域に結合しているかどうかを調べるために、ChIPグレードの抗Cas9抗体と標的および非標的領域のプライマーを用いて、選択されたsgRNAとの結合特異性を調べます。
参照論文一覧
- A geminivirus-based guide RNA delivery system for CRISPR/Cas9 mediated plant genome editing
- A localized nucleolar DNA damage response facilitates recruitment of the homology-directed repair machinery independent of cell cycle stage
- Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection
- Use of the CRISPR/Cas9 system as an intracellular defense against HIV-1 infection in human cells
- Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis
- An inducible lentiviral guide RNA platform enables the identification of tumor-essential genes and tumor-promoting mutations in vivo